1-3) غده

5

1-4) جوانه

5

1-5) ریشه

5

1-6) گل

5

2- ارقام سیب زمینی

5

2-1) رقم هاى خیلى زودرس و زودرس

5

2-2) رقم­ هاى متوسط رس یا میان رس

6

2-3) رقم­ هاى دیررس

6

3- تاریخچه

7

4- مواد موجود در سیب زمینی

8

5- مراحل کشت سیب زمینی

8

5-1) آماده كردن زمین برای كاشت سیب­زمینی

8

5-2) آماده کردن غده­ ها براى کاشت سیب­زمینی

9

5-3) کاشتن غده­ ها

10

5-4) آبیاری سیب زمینی

11

5-5) كوددهی سیب­زمینی

11

5 -6) وجین كردن و خاك دادن سیب­زمینی

12

5-7) برداشت

13

6- مراحل پس از برداشت و فرآوری سیب زمینی

14

7- اهمیت اقتصادی سیب­زمینی

15

8- ویروس­های بیماریزای سیب­زمینی

17

9- ویروس ایكس سیب­زمینیPotato virus X

20

9-1) آرایه­بندی

20

9-2) علائم

21

9-3) دامنه میزبانی طبیعی ویروس ایكس سیب­زمینی

22

9-4) گونه های میزبانی بكار رفته جهت تشخیص PVX

23

9-5) انتقال و انتشار ویروس

23

9-6) پراکنش جغرافیایی

24

9-7) خصوصیات ژنوم

24

9-8) خصوصیات پیكره ویروس

26

9-9) تکثیر ویروس ایکس سیب­زمینی در گیاه

27

9-10) تنوع ژنتیكی ویروس ایكس سیب­زمینی

28

10- روش­های ردیابی ویروس ایكس سیب­زمینی

30

10-1) سرولوژی

30

10-2) بررسی­های مولكولی واکنش زنجیره­ای پلی­مراز Polymerase Chain Reaction (PCR)

32

11- مطالعات انجام شده در ایران

37

12- هدف از این تحقیق

40

فصل دوم:مواد و رو ش­ها

1- جمع آوری نمونه از مزارع سیب­زمینی

42

2- آزمون الایزا Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- ELISA))

42

2-1) تهیه بافرها

42

2-1-1) بافرفسفات پتاسیم(PH, 7.4), (phosphate buffered saline-PBS)

43

2-1-2) بافر پوششی کربنات سدیم(PH, 9.6) , (Coating buffer)

43

2-1-3) بافر شستشو (PH,7.4),(Washing buffer)

43

2-1-4) بافر عصاره گیری (PH,7.4),(Extraction buffer)

43

2-1-5) بافر ترکیب پادتن-آنزیم (PH,7.4),(Conjugate buffer)

43

2-1-6) بافر زمینه (سوبسترا)(PH, 9.8),(Substrate buffer)

44

3- بررسی­های گلخانه­ای

45

4- بررسی انتقال

46

4-1) بررسی انتقال با سس

46

4-2) انتقال با تماس

46

5- بررسی خصوصیات مولكولی

46

5-1) استخراج آر.ان.ای (RNA Extraction)

46

5-2) واکنش زنجیره­ای پلی­مراز به روش رونوشت برداری برگردان (RT-PCR)

48

5-2-1) مرحله رونوشت برداری برگردان (Reverse transcriptase)

48

5-2-2) مرحله واکنش زنجیره ای پی. سی. آر

48

5-3) مشاهده محصول واكنش

49

5-4) خالص سازی قطعات تکثیر شده

49

5-4-1) جدا کردن قطعه ژل حاوی DNA تکثیر شده

49

5-4-2) حل کردن قطعه ژل و آزاد شده قطعه DNA

49

5-4-3)رسوب دادن DNA

50

5-4-4)شستشوی رسوب با بافر شستشو

50

5-4-5) حل شدن DNA در آب

50

5-6) آنالیز تبارازیی

51

6- خالص سازی ویروس PVX

53

7- اسپکتروفتومتری و تعیین غلظت ویروس جدا شده در آموده های(پرپارسیون) خالص شده

55

فصل سوم:نتیجه گیری

1- بررسی علائم آلودگی­های موجود روی سیب زمینی

56

1-1) علائم آلودگی روی سیب زمینی

56

1-2) نشانه­های آلودگی روی گوجه فرنگی

57

2- آزمون بیولوژیکی (واکنش گیاهان محک در مقابل عصاره حاوی ویروس ایکس)

58

2-1) گل تکمه­اییGomphrena globosaL.

58

2-2) داتورهDatura stramonium

59

2-3) سلمکChenopodium amaranticolor	59
2-4) توتونNicotiana glutinosaL	60
2-5) توتونNicotiana tabacum.cv. White Burley	60
2-6) توتونNicotiana tabacum. cv. Samsun	61
2-7) گوجه فرنگیLycopersicum esculentumMill	61
2-8) لوبیاPhaseolus vulgarisL.cv.Bountiful	61
2-9) باقلا.Vicia faba	61
2-10) ماش.Vicia sativaL.	62
2-11) دامنه میزبانی و علائم	62
3- درجه حرارت غیر فعال شدن (TIP)	63
4- آخرین حد رقت (DEP)	63
5- پایداری ویروس در شرایط آزمایشگاه (LIV)	63
6- مطالعه روش های انتقال	63
6-1) انتقال با سس	63
6-2) انتقال با تماس	63
7- خالص سازی	63
7-1) روشShepard, 1972	63
7-2) روشFribourg,1975	64
7-3) روشMoreira, 1980	65
8- تعیین پراکنش ویروس بر اساس آزمون الایزاELISA	65
9- بررسی خصوصیات مولكولی	72
9-1) نتایج حاصل از استخراج آر.ان.ای كل گیاه (RNA Extraction)	72
9-2) نتایج واکنش رونوشت برداری برگردان زنجیره­ای پلی­مراز (RT-PCR)	73
10) آنالیز تبازایی	74

فصل چهارم:بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات	76
فهرست منابع فارسی	84
فهرست منابع انگلیسی	85
چکیده انگلیسی	96

فهرست جداول
عنوان	صفحه
جدول1-1 اسامی ویروس های سیب زمینی	18
جدول 1-2 مقایسه بین ELISA, PCR, IC-PCR, RT-PCR-ELISA	35
جدول1-3 توالی آغازگرهای استفاده شده برای سنتز cDNA جهت ردیابی ویروس ایكس سیب­زمینی	37
جدول2-1 منطقه و تعداد نمونه های جمع آوری شده از مزارع سیب زمینی در همدان	42
جدول2-2 گیاهان میزبانی که برای مایه زنی ویروس ایکس سیب زمینی استفاده شد	45
جدول2-3 آغازگرهای استفاده شده در آزمون RT-PCR	49
جدول2-4 لیست توالی های کامل پروتئین پوششی PVX موجود در بانك ژن كه برای مقایسه با جدایه های ایرانی مورد استفاده قرار گرفته اند	52
جدول3-1درصد نمونه های علائم دار جمع آوری شده از مزارع همدان	57
جدول3-2 علائم ویروس ایکس بروی گیاهان محک	62
جدول 3-3 درصد آلودگی به چهار ویروس PVX، PVY، PVS و PLRV در مناطق بهار، رزن و کبودرآهنگ	65
جدول3-4 درصد آلودگی همزمان در مزارع استان همدان	66

فهرست نمودارها
عنوان	صفحه
نمودار1-1 توزیع میزان تولید سیب زمینی در استانهای كشور	16
نمودار3-1(Shepard, 1972) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation	64
نمودار3-2(Fribourg,1975) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation	64
نمودار3-3 Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation(Moreira,1980)	65
نمودار3-4 نمودار 3-4درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی منطقه بهار	68
نمودار3-5 درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی در منطقه رزن	69
نمودار3-6 درصد آلودگی مزارع سیب زمینی در منطقه کبودر آهنگ	71
نمودار3-7 درصد آلودگی ویروس های سیب زمینی در مزارع سیب زمینی استان همدان	72

ی نوشته‌ها