3-3-6- طرز تهیه ژل آگارز 39

3-3-7- هضم آنزیمی وکتور pGEM/dr2418توسط آنزیم NdeI 40

3-3-8- هضم آنزیمی وکتور pGEM/dr2418توسط آنزیم BamHI 41

3-3-9- تخلیص ژن سنتتیکdr2418از روی ژل. 41

3-3-10- برش پلاسمید pET-21a توسط آنزیم NdeI 43

3-3-11- برش وکتور pET-21a (هضم شده با NdeI) توسط BamHI 43

3-3-12- لیگاسیون وکتور pET-21a و ژن سنتتیکdr2418. 44

3-3-13- ترنسفورماسیون pET/dr2418در سلول مستعد DH5a. 45

3-4- توالییابی ژن سنتتیک در pET-21a. 45

3-5- القاء ساختارهای بیانی pET21a-dr2418توسط IPTG به منظور تولید پروتئین DR2418 دارای برچسب هیستیدین (His-tagged r-dR2418): 46

3-6- ارزیابی پروتئین DR2418 تولید شده به وسیله الكتروفورز در ژل پلی آكریلامید (SDS-PAGE) 47

3-7- یكسان سازی غلظت كلی پروتئینها در نمونه های قبل و بعد از القا جهت انجام SDS-PAGE. 50

3-8- شناسائی و تائید پروتئین His-tagged r-DR2418 با روش Western blot 50

3-9- نگهداری و ذخیره باكتریهای مولد پروتئین ِDR2418: 52

3-10- بررسی پایداری پلاسمیدها (Plasmid stability Test) 53

3-11- خالصسازی پروتئین نوترکیب DR2418 به روش کروماتوگرافی. 53

3-11-1- لیز سلولی باکتری E.coli 54

3-11-2- آماده كردن ستون. 54

3-11-3- تزریق نمونه و شستشو. 55

مقالات و پایان نامه ارشد

3-11-4- جدا سازی یپروتئین نوترکیب.. 55

3-11-4-1- روش دیالیز. 56

3-11-5-1- رسم منحنی استاندارد 56

3-11-5-2- تهیۀ محلول برادفورد 57

3-11-6- بازیافت و نگهداری ستون. 57

فصل چهارم : نتایج.. 58

4-1- غربال كردن كلنی های حاوی pGEM-B1 دارای قطعه DR2418: 59

4-2- غربال كردن كلنیهای E. coli DH5 حاوی pGEM-B1 دارای قطعه 59

4-2-1- تایید پلاسمیدهای استخداج شده با برش آنزیمی NdeI: 60

4-2-2- تایید پلاسمیدهای خطی شده حاوی ژن سنتتیک با هضم آنزیمیBamHI: 60

4-3- جداسازی قطعه از روی ژل و فرایند Ligation: 61

4-3-1- تایید صحت واکنش Ligation ژن در وکتور با روش تعیین توالی: 63

4-4- ترانفسفورم وکتور pET21a حاوی ژنdr2418به سلولE. coliOrigami و ارزیابی بیان پروتئین DR2418: 64

4-5- شناسائی و تائید پروتئین DR2418 با روش Western Blot Wet transfer)) 64

4-6- بیان ژنdr2418در حجم یک لیتر محیط کشت.. 66

4-7- برسی تخلیص پروتئین بر روی ژل SDS_PAGE: 67

4-8- نتایج سنجش غلظت پروتئین: 67

فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری…………. 69

ضمیمه: 76

پیشنهادات: 84

منابع. 85

چكیده انگلیسی.. 91

چکیده

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...