…….. .16

آنزیم های خارج سلولی……………………………………………………………………………………….. .16

گوآکولاز………………………………………………………………………………………………………… 17

فاکتور کلامپینگ………………………………………………………………………………………………. 17

علت پلی مورفیسم کوآگولاز………………………………………………………………………………… .18

لیپازها…………………………………………………………………………………………………………….. .18

هیالورونیداز……………………………………………………………………………………………………… .18

استافیلوکیناز (فیبرینولیزین) ………………………………………………………………………………… 19

نوکلئاز مقاوم به حرارت………………………………………………………………………………………. .19

توکسین های سیتولیتیک……………………………………………………………………………………… .19

توکسین آلفا (همولیزین-آلفا )……………………………………………………………………………… .19

توکسین بتا (اسفنگومیلیناز)………………………………………………………………………………….. .19

توکسین دلتا……………………………………………………………………………………………………… .19

توکسین گاما…………………………………………………………………………………………………….. .20

لکوسیدین………………………………………………………………………………………………………… .20

توکسین ها ……………………………………………………………………………………………………… 21

پایداری انتروتوکسین ها در برابر حرارت…………………………………………………………………. ..22

تولید انتروتوکسین……………………………………………………………………………………………… . 23

توکسین اکسفولیاتیو…………………………………………………………………………………………… .23

بیماریزایی خارج روده ای…………………………………………………………………………………….. .23

مسمومیت غذاییاستافیلوکوکوس…………………………………………………………………………… 20

علایم مسمومیت غذایی………………………………………………………………………………………… .25

فصل دوم: روش تحقیق

مواد و روش کار……………………………………………………………………………………………….. ..27

محیط های کشت ……………………………………………………………………………………………… 27

محیط غنی کننده……………………………………………………………………………………………….. . 27

محیط انتخابی…………………………………………………………………………………………………….. .28

تست های تاییدی. …………………………………………………………………………………………….. ..30

تست کاتالاز…………………………………………………………………………………………………….. .30

تست گلوکز…………………………………………………………………………………………………….. .30

تست مانیتول…………………………………………………………………………………………………….. .30

تست کوآگولاز…………………………………………………………………………………………………. .31

مشاهده میکروسکوپی………………………………………………………………………………………….. .32

نحوه نمونه برداری……………………………………………………………………………………………… .32

آماده کردن نمونه جهت انجام آزمایش. ………………………………………………………………….. .32

استخراج DNA………………………………………………………………………………………………….. .33

تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز………………………………… . 34

تعیین کمیت و کیفیت DNA با استفاده از اسپکتروفتومتری………………………………………. 34

واکنش زنجیره ای پلی مرازی……………………………………………………………………………….. 35

الکتروفورز فرآورده های PCR …………………………………………………………………………… 36

تفکیک قطعات تکثیریافته. ………………………………………………………………………………….. . 37

بارگذاری محصولات تکثیر شده……………………………………………………………………………… ..37

فصل سوم:نتایج تحقیق

نتایج شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس با کشت……………………………………………………….. ..32

نتایج تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز …………………………. 41

نتایج انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز براساس ژن Coa ……………………………………………. . 42

نتایج تعیین توالی……………………………………………………………………………………………….. ..43

فصل چهارم:بحث و نتیجه گیری

نتیجه گیری وپیشنهاد………………………………………………………………………………………….. . 51

فهرست منابع…………………………………………………………………………………………………….. 95

چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………. .98

جدول 1-1- اسامی گونه های شناسایی شدهاستافیلوکوکوس…………………………………………. .6

جدول 2-1- خصوصیات بیوشیمیاییاستافیلوکوکوس اورئوسدر مقایسه باسایر…………………. .. 9

جدول 3-1- صفات متمایز کننده و تشخیصاستافیلوکوکوسومیکروکوکوس………………… . 9

جدول 1-2-ترکیب ومقدار مواد تشکیل دهنده ی محیط کشت گوشت پخته نمک دار……….. 27

جدول2-2- ترکیب ومقدار مواد تشکیل دهنده ی محیط کشت برد پارکر آگار 29

جدول 3-2- غلظت مواد تشکیل دهنده لیز بافر…………………………………………………………. 34

جدول 4-2-اجزای واکنش زنجیره ای پلی مراز………………………………………………………….. .36

جدول 5-2-پرایمرهای مورد استفاده……………………………………………………………………….. .36

جدول 6-2- نحوه تهیه یک بافر TAE 50 X…………………………………………………………….. 37

جدول 7-2- بافر لودینگ 6X ………………………………………………………………………………. 37

جدول 8-2- محلول های مورد نیاز برای الکتروفورز ژل آگاروز 39

جدول 1-3- توزیع فراوا نی و درصدی نمونه های مورد آزمایش 39

جدول 2-3-توزیع فراوانی نتایج کشت برحسب نوع شیر در 103 نمونه مورد آزمایش 40

جدول 3-3- آلودگی نمونه ها برحسب سن پنیر در 103 نمونه مورد مطالعه 40

جدول 4-3- آلودگی نمونه ها برحسب نوع پنیر در 103 نمونه مورد مطالعه 40

جدول 5-3- نتایج نهایی نمونه های پنیر مورد بررسی از نظر رشد باکتری در 103 نمونه موردمطالعه 41

تصویر-1-1- تشکیل پرگنه های سیاه در محیط کشت برد پارکر آگار 56

تصویر3-1- الکتروفورز DNA های استخراج شده……………………………………………………… 59

تصویر3-2- الکتروفورز محصول PCR ژن coa در آگاروز 5/1 درصد…………………………… 60

چکیده

استافیلوکوکوس اورئوسبه عنوان سومین عامل مهم بیماری های با منشاء مواد غذایی مطرح می باشد. شیر ماده ای اولیه منا سب جهت رشداستافیلوکوکوس اورئوسبوده و فراورده های شیری منبع شناخته شده ای برای مسمومیت های استافیلوکوکی است.

این مطالعه جهت تعیین میزان شیوعاستافیلوکوکوس اورئوسدر پنیرهای محلی انجام شده است. مجموعا 103 نمونه بطور تصادفی از روستاهای اطراف ملکان و میاندوآب جمع آوری و با روش ها کشت و PCR مورد آزمایش قرار گرفتند.

براساس نتایج این مطالعه 7 مورد (6/11 درصد) از نمونه ها آلوده بهاستافیلوکوکوس اورئوسبودند و 7مورد دیگر(6/11درصد) از نمونه ها آلوده بهاستافیلوکوکوس اینترمدیوسبودند وبراساس نتایج بدست امده در این مطالعه 2 /23 درصد از نمونه هااستافیلوکوکوسهایکواگولاز مثبت آلوده بودند و8/76 درصد از نمونه ها بهاستافیلوکوکوسهایکواگولاز منفی آلوده بودند.

نتایج این تحقیق نشان داد که رعایت شرایط بهداشتی در حین تولید الزامی است و استفاده از شیر پاستوریزه در تهیه پنیر دارای اهمیت می باشد.